目前,世界范围内IVF-ET的周期妊娠率为30%~40%,大多在25%~35%,如何提高IVF-ET的妊娠率,是许多学者近年来致力探讨的问题,近10余年来已发展并衍生出一系列新技术。

  1.改良体外受精的体外培养条件

  从受精至桑葚胚发育这段时间,生理状态下是在输卵管内进行的,故用模拟输卵管成分的HTF作培养液,可明显提高受精率、卵裂率。近几年有学者用人输卵管壶腹部上皮细胞与精、卵一起培养,称为联合培养或共培养。使其更接近于生理状态,提高了妊娠率。

  2.简化体外培养程序

  ①合子输卵管移植: 卵子受精后成为合子即移回母体输卵管内。

  ②原核期孕卵输卵管内移植: 卵子受精后于原核期移植到母体输卵管内。

  ③输卵管胚胎期移植: 输卵管内环境是胚胎发育的良好环境。自然周期中,受精着床要在第6天即受精后的120小时前后。现行的IVF-ET过程,多在受精40~48小时后,即将2~4个细胞的胚胎移植到子宫腔内,此时移植胚胎在子宫内的命运难定,因为不符合生理情况。IVF-ET的成功率较低可能与此有关。

  解决此问题的方法有两个:

  ①输卵管胚胎期移植,可经腹腔镜或经阴道操作,后者更简便。

  ②将胚胎冷冻保存,在下一周期可选择良机以获得成功妊娠。对此问题尚需进一步深入研究。

  3.体外受精一阴道内培养

  1987年雷纳克斯在取卵1小时内将卵细胞置于含有3ml特制纯B2培养液(无需加血清)的冷冻储存管中,加入已处理好的10 000~20 000/m1的精子悬液,密封后将试管插入阴道内并固定。经阴道培养40~50小时后取出,将胚胎植入子宫腔内。他最初报道的连续100例患者中,22例临床妊娠,其中足月分娩17例,自然流产3例,输卵管妊娠2例。

  4.胚胎的冷冻保存

  在程序式降温仪控制下将正常胚胎冻存于-196℃液氯中,待需要时复苏使用。

  用途:①治疗周期多余的胚胎冷冻保存;②治疗周期发生OHSS可能性大,胚胎冻存于自然周期移植;③供胚。

  5.卵子或胚胎赠送

  用于:①卵巢早衰或卵巢切除;②有遗传性疾病或异常基因携带者。

  6.代理母亲的子宫内胚胎移植

  适用于缺乏子宫而能提供精子和卵子的不孕夫妇。

  7.显微受精

  对于常规IVF不能受精的患者,需采用辅助受精的方法,显微受精技术应运而生。

  8.辅助孵出技术

  透明带是早期胚胎卵裂球外周的非细胞结构性的黏蛋白,起着保护早期胚胎的作用。在IVF-ET的体外胚胎培养环境使透明带变硬,胚胎移植至宫腔内会出现孵出困难或障碍,这可能是种植失败的因素之一。辅助孵出技术是用化学方法使透明带变薄,或用化学物质、激光、机械方法在透明带上打孔,以利囊胚冲出透明带而促进着床的一种显微操作技术。

  9.囊胚培养和移植

  随共培养、序贯培养等胚胎培养技术的发展,体外受精获得的胚胎已可培养到囊胚期。选择l~2个囊胚移植,既可选择更具活力的胚胎,也有助于胚胎与内膜同步,从而提高妊娠率。此外,随移植胚胎数目的减少,还可减少或避免发生多胎妊娠。但目前囊胚冷冻的技术尚需完善。

  10.核移植

  对多次接受IVF-ET治疗失败以及因年龄偏大而不孕的妇女,其卵子胞浆可能存在严重缺陷。将其不成熟卵母细胞中的生发泡取出,移植给去核的成熟供卵细胞,经过电融合及卵母细胞体外成熟培养后受精,以恢复前者支持胚胎正常发育的能力,进而获得妊娠。对那些自身核型正常、怀疑胞浆有缺陷并且不愿接受供卵治疗的妇女提供了新的选择途径。此外,该技术也可对多精受精胚胎通过去掉多余的核以起到修复胚胎的作用,还可进行转基因研究。

  11.卵母细胞体外成熟培养

  目前IVF-ET促排卵药物费用昂贵,对部分患者有产生卵巢过度刺激综合征和激发激素依赖性肿瘤的危险。通过模拟体内卵子成熟的环境,将从小的卵泡中获得的未成熟卵母细胞在体外培养成熟,成为解决这些问题的有效途径。卵母细胞体外成熟培养对研究卵母细胞发育动力学、治疗某些不孕症和供卵具有重要意义。

  12.卵巢组织冷冻保存

  某些疾病(患癌症行系统化疗放疗;卵巢早衰;医源性卵巢手术切除等)对生殖功能的损害是不可逆的,在此之前行卵巢组织冷冻保存可保留女性生殖及内分泌功能,该技术建立后对治疗女性不孕症、建立卵巢“银行”有重要意义。